Um processo eficiente e de baixo custo para clarificação e ultrafiltração de proteínas recombinantes que expressam leveduras

A expressão de genes exógenos em leveduras pode não apenas produzir proteínas e peptídeos recombinantes, anticorpos e vacinas, citocinas, fatores de crescimento, hormônios e outras substâncias bioativas, mas também pode ser usada para produzir enzimas industriais, alimentos funcionais e materiais biológicos, que têm amplas perspectivas de aplicação. .

 

O sistema de expressão de levedura inclui dois sistemas de expressão comumente usados, isto é, sistema de expressão de saccharomyces cerevisiae e sistema de expressão de levedura metanotrófica. O sistema de expressão de levedura com metanol é o sistema de expressão de levedura mais amplamente utilizado atualmente, e Pichia é o mais comumente usado, que pode usar metanol como carbono e energia. Além disso, existem leveduras de Hansen, Sphaeroides e assim por diante.

 

Não importa o tipo de sistema de expressão de levedura, seus processos de separação e purificação a jusante são semelhantes, e o fluxo de processo específico toma como exemplo a expressão de proteínas recombinantes e medicamentos polipeptídicos em leveduras.

 

Os cassetes de membrana de microfiltração guiados adotam canal de fluxo aberto e modo de filtração de fluxo tangencial, que pode processar efetivamente líquidos de alimentação complexos, como líquido de fermentação de levedura e líquido de craqueamento de E. coli em alta velocidade, e pode garantir amplificação linear desde pequenos testes até escala de produção. O design modular compacto, a conexão simples da tubulação, a independência e a legibilidade do sistema podem proteger os operadores e prevenir a poluição biológica. E nenhuma verificação de manutenção e limpeza. Portanto, é muito adequado para a etapa de esclarecimento do processamento inicial a jusante.

 

O principal objetivo do processo UF/DF é remover impurezas e deslocar tampões. O cassete de membrana de ultrafiltração guiada tem boa homogeneidade do tamanho dos poros da membrana e forte hidrofilicidade, o que pode proporcionar à membrana maior fluxo e menor adsorção de proteínas, e design de canal de fluxo otimizado, com menor queda de pressão, fácil transferência de material e reduzir significativamente o tempo de filtração. Além disso, a série de produtos é completa e flexível para atender às necessidades de diversas aplicações em diferentes escalas. Portanto, é muito adequado para a etapa UF/DF do processamento downstream.

 

A seguir está o caso de aplicação da membrana guiacassetena expressão de proteínas recombinantes em leveduras.

 

Esclarecimento de microfiltração

Usamos {{0}},11 metros quadrados de cassete de membrana de poros de 0,22μm para clarificar 1,5L de líquido de fermentação de levedura (peso molecular da proteína alvo 42-55 KD) por microfiltração. Em todo o processo de microfiltração, foram investigadas a taxa de recuperação da proteína alvo, a alteração da turbidez e o esgotamento do fluxo da membrana.

0-17min é o processo de concentração, 17-32min é o processo de lavagem e filtração. Durante todo o processo de microfiltração, o TMP aumentou gradualmente, a velocidade de entrada do líquido permaneceu inalterada e o fluxo médio do material foi de 45LMH.

A turbidez do líquido era de 600NTU antes da microfiltração e 8NTU após a microfiltração, e a turbidez mudou obviamente.

Os resultados mostraram que o rendimento da proteína alvo foi > 90%. O cassete de membrana Guidling Technology de 0,22 μm é estável e adequado para este cenário de aplicação.

 

Concentração de ultrafiltração

 

 

Os resultados mostraram que a proteína alvo estava completamente presa. Os cassetes de membrana Guidling Technology 10kd podem funcionar de forma estável e são adequados para este cenário de aplicação.

A maioria das proteínas recombinantes expressas pela levedura não foram altamente expressas. A turbidez do líquido filtrado foi obviamente reduzida e a taxa de recuperação de proteínas foi maior. Como o tempo cromatográfico subsequente é muito longo, causará efeitos adversos na proteína, para encurtar o tempo de amostragem cromatográfica, uma etapa de concentração de ultrafiltração pode ser adicionada, e a proteína alvo pode ser concentrada rapidamente após a amostra, o que pode atingir o objetivo de economizar tempo, reduzindo o volume de enchimento e reduzindo assim o custo de produção.

 

Os cassetes de membrana de microfiltração da Guidling Technology geralmente podem reduzir a turbidez do líquido de alimentação para menos de 20NTU, atendendo totalmente às necessidades de ultrafiltração e cromatografia subsequentes. A taxa de recuperação de ultrafiltração dos cassetes de membrana de ultrafiltração irá variar devido aos diferentes materiais, a taxa de recuperação geral pode chegar a 90-95%.

A Guidling Technology convida você a solicitar kits de teste para avaliação relacionada.

 

Sobre Guidling

A Guidling Technology é uma empresa nacional de alta tecnologia com foco em produtos biofarmacêuticos, cultura celular, purificação e concentração de biomedicina, diagnóstico e fluidos industriais. Desenvolvemos com sucesso dispositivos de filtro centrífugo, cassetes de ultrafiltração e microfiltração, filtro de vírus, sistema TFF, filtro de profundidade, fibra oca, etc. Nossas membranas e filtros de membrana são amplamente utilizados em concentração, extração e separação de pré-filtração, microfiltração, ultrafiltração e nanofiltração. Nossas diversas linhas de produtos, desde filtração laboratorial pequena e descartável até sistemas de filtração de produção, testes de esterilidade, fermentação, cultura celular e muito mais, atendem às necessidades de testes e produção. A Guidling Technology está ansiosa para cooperar com você!